Изучение влияния условий хранения сыворотки крови на паттерн антиуглеводных антител человека
Студент
Московский государственный университет имени ,
Физический факультет, Москва, Россия
E–mail: generals1179@gmail.com
В наши дни все чаще человечество сталкивается с проблемой диагностики и прогностики патологических состояний организма. Весомую роль в лечении пациента играет точная и своевременная диагностика заболевания. Стандартные анализы, используемые в лечебно профилактических учреждениях, не дают четкой картины. Сыворотка крови используется для широкого спектра лабораторных, биохимических, иммуноферментных анализов и иммунологических исследований (белковый состав, ферменты, гормоны, онкомаркеры, ВИЧ-инфицирование, гепатиты и пр.). Принято считать, что циклы разморозки-заморозки приводят к потере активности многих компонент сыворотки, в том числе, и иммуноглобулинов. [1] Так же считается, что при хранении до 48-ми часов некоторые компоненты сыворотки не теряют своей активности [5]. Однако это не выполняется для всех компонентов [2] Для хранения при низкой температуре необходимо добавить криопротектор - глицерин (до 50%), этилен гликоль (до 30%) или полиэтиленоксид (1 млгр на 100 мл), для понижения точки заморозки, иначе иммуноглобулины сыворотки начнут денатурировать. [6]
Основной целью работы являлось изучение влияния перечисленных выше добавок на стабильность компонентов сыворотки, а также влияния температурных режимов и циклов заморозки-разморозки на активность иммуноглобулинов IgA, IgG, IgM в сыворотке крови человека.
Для изучения активности иммуноглобулинов была использована новая разработка – гликочип [4]. Гликочип представляет собой стеклянный слайд, на который нанесен полимер с активированными карбоксильными группами, ковалентно на них иммобилизованы олигосахариды, в составе которых имеется аминопропильная спейсерная группа (рис.1). Для анализа паттерна антиуглеводных антител сыворотки крови человека сначала на гликочип наносилась сыворотка крови, антитела сыворотки проявляли с помощью античеловеческих антител козы, меченных флуорофором Alexa-647 (рис 2.), интенсивность флуоресценции измеряли с помощью конфокального сканера ProScanArray HT с разрешением 5 мкм, полученные данные обрабатывали с помощью программного обеспечения. [3]
Рисунок 1. Устройство гликочипа. 
Рисунок 2. Анализ антиуглеводных антител с помощью гликочипа.
Проведенное исследование показало уменьшение активности иммуноглобулинов с каждым циклом разморозки-заморозки и длительностью хранения в несколько раз. Было показано отрицательное влияние хранения сыворотки крови на паттерн антиуглеводных антител в сыворотке крови при отсутствии применения криопротекторов, консервантов и не соблюдении температурных режимов.
1. Жибурт : учебник.- СПб: Питер, 200с.
2. , , Володин крови, её компонентов и препаратов: учебное пособие. Под ред. - Кемерово: КемГМА, 20с.
3. Blixt O, Head S, Mondala T, Scanlan C, Huflejt ME, et al. Printed covalent glycan array for ligand profiling of diverse glycan binding proteins. Proc Natl Acad Sci USA 2004.101: 17033-8
4. Bovin NV, Huflejt ME. Unlimited glycochip. Trends in Glycoscience and Glycotechnology 2008.20: 245-58
5. A. Marjani: Effect Of Storage Time And Temperature On Some Serum Analytes. The Internet Journal of Laboratory Medicine. 2007 Volume 2 Number 2
6. Hazen KC, Bourgeois LD, Carpenter JF: Cryoprotection of antibody by organic solutes and organic solute/divalent cation mixtures. Arch Biochem Biophys. 1988 Nov 15;267(1):363-71.
