Морфологические и цитохимические особенности клеток крови морских млекопитающих в связи с адаптацией к среде обитания (стр. 2 )

Суммарные гистограммы различаются (сравнение по критерию хи-квадрат, р<0.001). Численность же лимфоцитов в классах со значениями, большими средних, наоборот, одинакова (р<0.01) в 9 случаях из 10 (табл. 2).

Разложение суммарных распределений на нормальные составляющие по (1963), показало, что число клеток с высокой (выше средней) активностью ферментов равно: НЭ – 13.1%; СДГ – 11.0%; НАДНр – 13.6%; НАДФНр – 13.1%. Средние этих групп лимфоцитов выше средних суммарных распределений в 1.9-2.4 раза. Сходный результат был получен при анализе субпопуляционного состава лимфоцитов человека и лабораторных животных по активности дегидрогеназ (Катосова, 1971; Михайлова и др., 1972; Соколов и др., 1975; Нарциссов, 1978; Робинсон и др., 1986).

Таблица 2 Сопряженность суммарных частот лимфоцитов с высокими значениями цитохимических признаков (нумерация признаков согласно табл. 1)

Более точное определение числа и параметров нормальных компонент в составе суммарных распределений проведено по методу Ч. Бхаттачариа (Bhattacharya, 1967). Оно оказалось неодинаковым для различных признаков: от трех для НАДНр до шести для СДГ. Тем не менее, лимфоциты составляют две группы: многочисленную, с относительно низкими значениями средних и малочисленную из одного (в случае НЭ – из двух) нормального распределения со средней, выше общей средней в 2.5-3.4 раза для ферментов и в 1.4 раза – для нуклеиновых кислот. Таким образом, по крайней мере, часть лимфоцитов периферической крови афалин обладают одновременно высокими или низкими значениями нескольких параметров. Это, по данным литературы, различает Т - и В-лимфоциты у ряда видов животных.

Два основных дифференцировочных типа лимфоцитов (Т - и В-клетки) представлены множеством субпопуляций и клонов, стимуляция которых происходит при различных специфических воздействиях. Поэтому, для выяснения направленности и силы связей между цитохимическими признаками в популяции лимфоцитов в целом мы вычисляли коэффициенты линейной корреляции статистических и информационных параметров гистограмм распределения лимфоцитов, с различной степенью обобщения отражающих разнообразие клеток. Как существенные, приняты значения коэффициентов корреляции, достоверные при Р=0.95 и Р=0.99 (рис. 7 , пунктирные и сплошные линии, соответственно).

По числу и силе корреляционных связей друг с другом цитохимические признаки неравноценны. Наибольшее число статистически значимых коэффициентов корреляции друг с другом имеют НАДН2 и НАДФН2-тетразолий редуктазы как ферментные системы, выполняющие функцию окисления коферментов-переносчиков электронов для энергозависимых биохимических реакций. В силу общности функции ферментов, а также наличия непосредственной метаболической связи между НАД и НАДФ, существенные корреляции между параметрами распределений по НАДНр и НАДФНр многочисленны.

Рис. 7 – Корреляции между цитохимическими признаками лимфоцитов афалин

Характерно также, что из 9 корреляций распределений по содержанию НК 7 приходятся на НАДНр и НАДФНр, поскольку синтез РНК, не прекращающийся в циркулирующих лимфоцитах, является энергозависимым процессом. Деятельность сукцинатдегидрогеназы непосредственно связана с НАД и НАДФ, что отражается в прочных корреляционных связях ее с параметрами распределения по активности НАДН– и НАДФН–дегидрогеназ. Из 15 существенных корреляций НЭ 11 приходятся на НАДФНр. Это отражает зависимость окислительно-восстановительных процессов в цитоплазме клетки от состояния ферментов лизосом. Промежуточным же переносчиком электронов в цитоплазматическом матриксе является НАДФН2 (Ленинджер, 1985).

Наибольшее число существенных корреляций имеет НАДФН-тетразолий редуктаза. Согласно принципам метода корреляционных плеяд (Терентьев, 1959), НАДФНр может играть роль признака-индикатора в данном комплексе цитохимических признаков.

Несмотря на существование у морских млекопитающих особенностей обмена веществ, связанных с водным образом жизни, направленность и сила корреляций между параметрами, отражающими состав популяции лимфоцитов афалин по цитохимическим признакам, соответствует принятой общей схеме внутриклеточных метаболических процессов.

Глава 4 ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОЧНОГО СОСТАВА КРОВИ ТЮЛЕНЕЙ

4.1 Серые тюлени

Определение лейкоцитарной формулы крови щенков серых тюленей различных возрастных групп позволило выявить существенные различия между ними У животных, закончивших молочное вскармливание, соотношения числа нейтрофилов (С) и лимфоцитов (Л) близко к 1 (рис. 8). К возрастным особенностям состава крови относится уравнивание в определенные периоды количества лимфоцитов и нейтрофилов, "физиологический перекрест". У человека это явление отмечается на 4-е сутки после рождения и в 4 года (Бобова и др., 2003). Позднее окончательно устанавливается нейтрофильный профиль крови. Периоды сближения числа нейтрофилов и лимфоцитов известны у лошадей, крупного рогатого скота, кроликов, свиней, кур (Любин, Конова, 2005; Бессарабов и др., 2009).

Рис. 8. Соотношение лейкоцитов различных типов у серых тюленей разного возраста.

Неспецифическая эстераза (НЭ) при коротком периоде окрашивания (2 часа) выявляется лишь в части лимфоцитов тюленей. У ряда видов млекопитающих: человека (Kulenkampff et al., 1977), обезьяны (Kato, Kurihara, 1980), овцы (Dixon, Moriarty, 1980), быка (Yang et al., 1979), мыши (Müller et al., 1975), крысы и кошки (Dockrell et al., 1978) а также обыкновенной жабы, Bufo bufo (Garavini, 1981), большинство эстеразоположительных лимфоцитов – Т-клетки. У серых тюленей число эстеразоположительных лимфоцитов значительно повышается к периоду начала самостоятельного питания (табл. 2), что, вероятно, связано с развитием имммунной системы, дифференцировкой Т-лимфоцитов. У новорожденных человека количество Т-клеток и эстеразоположительных лимфоцитов возрастают в первые недели жизни (Lassila, Alanen, 1982). При длительном периоде окрашивания (21 час) НЭ выявляется во всех лимфоцитах тюленей и дельфинов. Число гранул окрашенного продукта в реакции на НЭ (показатель уровня активности лизосомного аппарата клетки) снижается во время начала самостоятельного питания, а затем возрастает. Число лимфоцитов с парануклеарной эстеразной реакцией (ПН) (у человека это "нулевые" клетки, Т-супрессоры и "киллеры") также падает, а затем повышается, оставаясь, тем не менее, на более низком уровне, чем у новорожденных и кормящихся молоком детенышей ("бельки").

Среднее число ЯОРAg в одном лимфоците у тюленей, кормящихся рыбой (табл. 3), ниже, чем у остальных (р=0.001–0.05). Изменение величины отношения площади ЯОРAg к площади ядра также свидетельствует о снижении с возрастом активности организаторов ядрышка (р<0.01).

Таблица 2 Показатели лейкоцитов крови щенков серых тюленей (M±m)

Примечание. ЯОРAg – среднее число окрашенных серебром районов организаторов ядрышка в одном лимфоците; НЭ – среднее число эстеразоположительных гранул в лимфоците; НЭ+ – число эстеразоположительных лимфоцитов; ПН – процент лимфоцитов с парануклеарным типом эстеразной реакции; Лф – относительное число лимфоцитов; Лкц – абсолютное число лейкоцитов в 1 л крови.

Таблица 3 Статистические параметры распределений лимфоцитов серых тюленей по величине отношения площади ЯОРAg к площади ядра

В первых 3-х группах тюленей а также в 5-й показатель эксцесса, т. е. "крутизна" распределения ниже, чем в 4-й и 6-й, что может быть обусловлено существованием в организме тюленей множества субпопуляций лимфоцитов, значительно различающихся по активности организаторов ядрышка.

Таким образом, после рождения, в течение лактации и затем после завершения молочного вскармливания, во время ювенильной линьки происходят значительные изменения лейкоцитарного состава крови детенышей серых тюленей. Представленные данные свидетельствуют, что у щенков серого тюленя становление клеточного иммунитета наиболее интенсивно происходит в первые 1.5 месяца жизни. В возрасте 3-4-х месяцев, когда животные начинают самостоятельно питаться рыбой, процессы пролиферации и дифференцировки лимфоидных клеток, осуществляющих реакции специфического иммунитета, замедляются.

4.2 Гренландские тюлени

В мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза, у гренландских тюленей, как и у многих видов наземных млекопитающих (Кудрявцев и др., 1969), включая представителей отряда хищных, филогенетически наиболее близких к настоящим тюленям, численно преобладают нейтрофилы (табл. 4).

Таблица 4 Лейкоцитарная формула крови гренландских тюленей (М±m), %

Щенки 1994 года рождения имеют более низкое, чем детеныши предыдущих лет, относительное число лимфоцитов. Такие же сдвиги в лейкоцитарной формуле крови наблюдались у северных морских котиков при адаптации к неволе (Занина, Занин, 1990) и сивучей при 20-дневном голодании (Коваль и др., 1986). Мы не исключаем, что одной из причин этих различий может быть то, что от времени окончания молочного вскармливания до взятия крови у различных особей в разные годы прошло неодинаковое время. Однако отмеченную особенность формулы крови имеют как серки, нормально перелинявшие и нормально упитанные, так и серки-заморыши, и заморыши-хохлуши. В отличие от ушастых, у настоящих тюленей период голодания во время ювенильной линьки и некоторое время после нее является естественным. Кроме того, по количеству гликогена в гранулоцитах щенки разного возраста различаются незначительно (табл. 5) . В 1991–1993 годах у щенков гренландских тюленей обнаружено ежегодное увеличение степени носительства микобактерий, представляющих потенциальную угрозу здоровью тюленей (Соколов и др., 1994). Состояние здоровья потомства зависит и от возраста самок, участвовавших в размножении, число молодых среди которых в 1980-е годы снизилось и продолжает падать (Тимошенко, 1998). Различия по средним значениям показателей лейкоцитарной формулы крови могут быть следствием воздействия любого из упомянутых факторов либо результатом их суммарного влияния.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах: 1 2 3 4